SPR表面等离子共振技术服务

研究背景与挑战

临床痛点：KRAS G12D是实体瘤中最常见的致癌KRAS突变亚型，在胰腺导管腺癌（PDAC）中尤为普遍，但在临床环境中仍然缺乏有效的靶向治疗药物。传统KRAS G12C抑制剂通过共价靶向获得性半胱氨酸起效，而G12D突变缺乏类似的亲核残基，导致共价抑制剂开发长期受阻。

SPR技术应用

研究团队采用表面等离子体共振（SPR）技术进行高通量化合物筛选与结合动力学表征：

• 亲和力筛选：将KRAS G12D蛋白固定在SPR芯片表面，对化合物文库进行系统性筛选，实时监测结合信号，快速锁定候选分子。

• 动力学表征：通过SPR测定候选化合物与KRAS G12D的结合和解离速率常数（ka/kd），计算平衡解离常数（KD），筛选出高亲和力抑制剂HRS-4642。

• 选择性评价：利用SPR评估HRS-4642对不同KRAS突变亚型的选择性，确认其对G12D的优先结合。SPR亲和力测定结果显示，HRS-4642与KRAS G12D的结合亲和力为0.083 nM。

主要研究发现

成功开发了非共价抑制剂HRS-4642，其SPR测定的结合亲和力高达0.083 nM，是目前报道的最高亲和力的非共价KRAS G12D抑制剂之一。1期临床试验显示积极抗肿瘤活性，为KRAS G12D突变患者提供了潜在治疗方案。

研究背景与挑战

PROTAC（蛋白靶向嵌合体）是一种新型药物模式，通过同时结合靶蛋白和E3泛素连接酶，诱导靶蛋白降解。PROTAC分子的核心功能取决于其能否形成稳定的"靶蛋白-PROTAC-E3连接酶"三元复合物。然而，传统的亲和力测定方法难以直接表征三元复合物的形成过程和协同性，需建立可靠的生物物理检测方法。

SPR技术应用

研究团队利用表面等离子体共振（SPR）技术直接表征PROTAC诱导的三元复合物形成：

• 芯片固定：将生物素化的E3连接酶DCAF1固定在链霉亲和素（SA）传感器芯片上。

• 二元结合测定：分别注入PROTAC分子和靶蛋白WDR5，测定各自与DCAF1的二元结合亲和力（作为基线对照）。

• 三元复合物验证：以1:10的比例混合PROTAC与WDR5，注入芯片表面。在PROTAC和WDR5同时存在时，结合响应值（RU）显著增加，表明形成了DCAF1-PROTAC-WDR5三元复合物。

主要研究发现

通过SPR实验，研究团队直接证实了PROTAC分子能够介导DCAF1与WDR5之间形成稳定的三元复合物。PROTAC 4（OICR41114）诱导的三元复合物形成信号更强，且在细胞实验中表现出更优的WDR5降解效果。本研究为PROTAC分子的理性设计和优化提供了关键数据支持。